ตามที่ได้เกิดอุบัติเหตุรถกระบะเสียหลักพุ่งตกลงไปในพื้นที่ก่อสร้างบนทางหลวงหมายเลข 321 ที่ กม.33+200 อ.กำแพงแสน จ.นครปฐม เหตุเกิดเมื่อวันพฤหัสบดีที่ 4 สิงหาคม 2565 เวลาประมาณ 02:30 น. นั้น สาเหตุเนื่องจากเมื่อรถกระบะขับมาตาม ทล.321 ก่อนถึงที่เกิดเหตุ ได้มีรถยนต์สิบล้อขับแซงกระทันหัน ทำให้ต้องเบี่ยงหลบออกทางด้านซ้ายแล้วเข้าไปในพื้นที่โครงการก่อสร้างที่ขุดผิวทางเพื่อวางท่อระบายน้ำ ซึ่งบริเวณดังกล่าวมีป้ายเตือนและไฟกระพริบ แต่เนื่องจากมีฝนตกหนักคาดว่าป้ายเตือนและไฟกระพริบอาจจะล้ม เป็นเหตุให้รถพุ่งตกลงไปและมีผู้ได้รับบาดเจ็บเล็กน้อย 1 ราย

จากอุบัติเหตุดังกล่าว กรมทางหลวงขออภัยสำหรับเหตุการณ์ที่เกิดขึ้น โดยผู้รับจ้างได้เข้าช่วยเหลือในการยกรถกระบะขึ้นจากที่เกิดเหตุ พร้อมให้ความช่วยเหลือผู้เสียหายแล้วในเบื้องต้น
ทั้งนี้ กรมทางหลวงได้กำชับให้โครงการก่อสร้างดำเนินการเพิ่มมาตรการความปลอดภัยในระหว่างการก่อสร้าง และหมั่นตรวจสอบความพร้อมของอุปกรณ์อำนวยความปลอดภัยอย่างเคร่งครัด เพื่อสร้างความมั่นใจและความปลอดภัยให้กับประชาชนผู้ใช้ทาง